UA-Glo® Nano-luc Live Cell Assay System,UA BIOSCIENCE_specification/price/image

Product Detail
Company Profile

Product Specification

Synonyms	微分裂荧光素酶活细胞内检测试剂盒
Stability & Storage	-20℃及以下避光储存，有效期12个月。长期保存，底物建议-80℃保存。底物初次使用后应分装并保存于-20℃及以下，避免冻融次数超过3次以上。

Background

微分裂荧光素酶技术（Nanoluc split enzyme technology）将荧光素酶蛋白分子分成两个不同的片段，分别表达，两个片段具有高亲和力，在同一反应体系中可以快速自动生成具有荧光素酶活性的完整的酶分子。微分裂荧光素酶活细胞内检测试剂盒（Nanoluc Live Cell Assay System）提供可以进入细胞的反应底物，而反应体系的两个酶片段分别克隆在两个表达载体上，并分别与两个目标蛋白表达在同一分子上，作为两个目标蛋白分子的标签。检测载体共转染后的细胞的荧光素酶活性可以用于细胞内两个目标蛋白的表达水平，相互作用，动态变化等研究

Components

反应缓冲液及底物分别混灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶及2ml的螺旋管中，规格如下：

缓冲液	底物	可检测的 96-孔板孔数	可检测的 384-孔板孔数
10 ml	100μl	330 wells	1,000 wells
100 ml	1ml	3,300 wells	10,000 wells
10X100 ml	10X1 ml	33,000 wells	100,000 wells

Protocol

1. 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，待检测细胞可以是表达带有分裂荧光素酶大小片段标签的目标蛋白的瞬转细胞，稳定细胞株或内源性表达细胞系。建议使用白板。

2. 根据项目需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。

3. 取出检测缓冲液，平衡至室温。离心底物管10秒钟，将内容物收集于管底，放置在冰盒上。

4. 取出待测细胞培养板，平衡至室温。

5. 准备检测试剂：建议加50 µl 的检测试剂到 96孔板细胞中, 或10 µl 试剂到384 孔板细胞中。根据实验需求确定配制的试剂量。配制时将底物加到检测缓冲液中，充分混匀。试剂盒中底物是200x，使用前用缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。

6. 吸去检测孔细胞培养液，加入50 µl 的1x检测工作液到每个96孔板检测孔中,或10 µl 试剂到每个384 孔板检测孔中，轻轻振荡15秒钟。如果是悬浮细胞，需要将反应板离心后，小心吸去培养液，然后再加入1x检测工作液。

7. 在荧光读板仪上读取荧光信号。保存数据，进行数据处理分析。

Guidelines

1. 试剂量：非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。

2. 不同批次的试剂不建议混合使用。

3. 分装储存：按照说明书分装储存反应试剂，保证试剂的稳定性。

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