1. 细胞准备
1) 在 96 孔或 384 孔白色细胞培养板铺合适密度的细胞。
2) 根据实验设定,细胞孵育一定时间后将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。建议设置只加溶剂载体的细胞对照(阴性对照)和只加溶剂载体的细胞培养基对照(空白对照)(说明详见注意事项 4)。
3) 根据实验需求继续培养合适的时间诱导细胞凋亡。
2. Caspases 3/7 细胞凋亡检测
1) 取出Caspases 3/7 细胞凋亡检测试剂,在室温平衡 20 分钟。轻摇混匀。
2) 取出待测细胞培养板,在室温平衡 20 分钟。
3) 加 50 µl 的检测试剂到 100 µl 96 孔板细胞中, 或 10 µl 试剂到 20 µl 384 孔板细胞中,振板 2 分钟,放置暗处室温孵育 30-60min 。荧光信号一般在加入检测试剂 1hr 左右达到最大值。最早可以在加入检测试剂后 30min 读板, 最晚不要超过 3hr。
4) 在荧光读板机上读取荧光信号。
1. 按照说明书分装储存反应试剂,保证试剂的稳定性。
2. 非经严格验证,不建议随意改变反应试剂用量。
3. 荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和测试样品需要平衡到室温(22℃-26℃),测试过程温度保持恒定(±1℃)。
4. 空白对照是对细胞培养系统和Caspase 3/7 检测试剂相关的背景荧光的测量,可以选择从检测值中减去空白对照后再进行相应的计算。细胞阴性对照反映了待测细胞的基础Caspase 3/7 活性,可作为实验结果解释的参考。
5. 本产品仅作科研用途。